熒光顯微鏡比普通顯微鏡復(fù)雜，使用也比較麻煩，但只要注意下面幾點(diǎn)，用戶自行作些校準(zhǔn)還是很容易的。

1、汞燈的校準(zhǔn)

基于熒光顯微鏡的原理，決定了選用汞燈作為其光源。由于標(biāo)本產(chǎn)生的熒光比較弱，為了得到較亮的圖像，汞燈的校準(zhǔn)至關(guān)重要。具體校準(zhǔn)步驟如下：

①開(kāi)啟汞燈后，在熒光顯微鏡工作臺(tái)上放一張白紙，并從物鏡轉(zhuǎn)換器中轉(zhuǎn)出物鏡，即轉(zhuǎn)換器上出現(xiàn)的空孔位于光軸上，卸去轉(zhuǎn)換器上保護(hù)蓋(如無(wú)空孔，可卸掉一個(gè)低倍物鏡，校準(zhǔn)完畢后再旋上)。轉(zhuǎn)動(dòng)熒光顯微鏡主體內(nèi)的濾光片座，選一個(gè)透過(guò)綠光的濾光片組，使反射照明有光通過(guò)物鏡轉(zhuǎn)換器孔，此時(shí)在白紙上可以看到汞燈照亮的光斑。如光斑太亮，可以插入中性濾光片，或帶上太陽(yáng)眼鏡，以保護(hù)眼睛。

②轉(zhuǎn)動(dòng)聚光鏡調(diào)焦旋手，使汞燈光弧在白紙上成像清晰。因汞燈室內(nèi)裝有一個(gè)球面反光鏡，用來(lái)增加亮度，于是在白紙上看到兩個(gè)光弧的像。旋轉(zhuǎn)汞燈調(diào)節(jié)旋手和反光鏡位置調(diào)節(jié)旋手，使兩個(gè)光弧并立。再轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡聚焦調(diào)節(jié)旋手，使兩個(gè)光弧有接近相等的亮度。

③旋轉(zhuǎn)汞燈調(diào)節(jié)旋手和反光鏡位置調(diào)節(jié)旋手，使兩個(gè)光弧重合。再調(diào)節(jié)聚光鏡調(diào)焦旋手，得到放大和均勻的光弧像。這樣汞燈校準(zhǔn)工作就完成了。轉(zhuǎn)入物鏡后，根據(jù)物鏡具體倍率，稍微調(diào)節(jié)一下聚光鏡調(diào)焦旋手就可以了。

2、孔徑光闌和視場(chǎng)光闌的校準(zhǔn)

一般熒光顯微鏡均采用柯勒照明。所謂柯勒照明是一種能夠得到圖像Z大對(duì)比和Z大分辨的折中方法。這時(shí)，燈絲成像在孔徑光闌上，一般也成像在物鏡Z后一片鏡框上。孔徑光闌是限制光源大小的光闌，而視場(chǎng)光闌是限制人眼在目鏡里看到視野大小的光闌。只有在正確校準(zhǔn)柯勒照明的條件下，熒光顯微鏡才能獲得它的Z佳光學(xué)性能。

柯勒照明校準(zhǔn)方法如下：

①調(diào)焦：把樣品放在工作臺(tái)上，沿光軸方向移動(dòng)工作臺(tái)或物鏡，對(duì)樣品進(jìn)行調(diào)焦，使成像清晰。

③關(guān)小視場(chǎng)光闌，于是在視場(chǎng)里可以看到視場(chǎng)光闌的影子，即周圍一圈變暗，只有中間是亮的。調(diào)節(jié)聚光鏡上下位置，使視場(chǎng)光闌邊緣清晰。調(diào)節(jié)聚光鏡上調(diào)中螺絲，使視場(chǎng)光闌居中。然后再調(diào)大視場(chǎng)光闌，使它略大于目鏡視場(chǎng)。

④減小孔徑光闌，一直到視場(chǎng)里看到Z好的像為止，一般孔徑光闌為其Z大時(shí)的70%。