熒光是一種物理現(xiàn)象，其中特定的化合物在被另一種顏色的光照射后很快就會(huì)發(fā)出特定顏色的光。在本文中，我們簡要介紹了熒光物理學(xué)和現(xiàn)代熒光顯微鏡的設(shè)計(jì)要點(diǎn)。我們?cè)趯?shí)際意義上進(jìn)一步討論了熒光染料以及了解它們的激發(fā)和發(fā)射光譜的重要性。除了熒光串?dāng)_引起的假陽性結(jié)果問題外，還討論了單熒光和多熒光應(yīng)用中的適當(dāng)過濾。

熒光是一種物理現(xiàn)象，其中特定的化合物在被另一種顏色的光照射后很快就會(huì)發(fā)出特定顏色的光。在本文中，我們簡要介紹了熒光物理學(xué)和現(xiàn)代熒光顯微鏡的設(shè)計(jì)要點(diǎn)。我們?cè)趯?shí)際意義上進(jìn)一步討論了熒光染料以及了解它們的激發(fā)和發(fā)射光譜的重要性。除了熒光串?dāng)_引起的假陽性結(jié)果問題外，還討論了單熒光和多熒光應(yīng)用中的適當(dāng)過濾。

為了使樣品適合熒光顯微鏡檢查，它要是熒光的。有幾種創(chuàng)建熒光樣品的方法；主要技術(shù)是用熒光染料標(biāo)記，或者在生物樣品的情況下，熒光蛋白的表達(dá)。或者，可以使用樣品的固有熒光。在生命科學(xué)中，熒光顯微鏡是一種強(qiáng)大的工具，它允許對(duì)樣本進(jìn)行特異性和敏感的染色，以檢測(cè)蛋白質(zhì)或其他感興趣的分子的分布。因此，生物樣品的熒光染色技術(shù)多種多樣。

熒光顯微鏡生物科學(xué)中的應(yīng)用

生物熒光

許多熒光染料是為一系列生物分子設(shè)計(jì)的。其中一些是本質(zhì)上具有熒光并結(jié)合感興趣的生物分子的小分子。其中主要的例子是核酸染色劑，如DAPI和Hoechst和 DRAQ5 和 DRAQ7，它們都與DNA的小溝結(jié)合，從而標(biāo)記細(xì)胞核。其他是藥物、毒素或結(jié)合特定細(xì)胞結(jié)構(gòu)并已用熒光報(bào)告分子衍生的肽。這類熒光染料的一個(gè)主要例子是鬼筆環(huán)肽，它用于染色肌動(dòng)蛋白。哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的纖維。一種新的肽，稱為膠原雜交肽，也可以與熒光團(tuán)結(jié)合，用于染色變性的膠原纖維。使用結(jié)合纖維素或果膠的染色劑或染料對(duì)植物細(xì)胞壁進(jìn)行染色。對(duì)能夠?qū)χ参锛?xì)胞進(jìn)行活體成像的高特異性熒光探針的探索仍在進(jìn)行中。

免疫熒光

免疫熒光是一種利用抗體與其抗原的高度特異性結(jié)合來標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的特定蛋白質(zhì)或其他分子的技術(shù)。用對(duì)目標(biāo)分子特異的一抗處理樣品。熒光團(tuán)可以直接與一抗偶聯(lián)。或者，可以使用與第Y抗體特異性結(jié)合的熒光團(tuán)偶聯(lián)的第E抗體。例如，在識(shí)別微管蛋白的小鼠中產(chǎn)生的一抗與用熒光團(tuán)衍生的二抗結(jié)合的抗小鼠二抗可用于標(biāo)記細(xì)胞中的微管。

熒光蛋白

現(xiàn)代對(duì)遺傳學(xué)的理解和可用于修飾 DNA 的技術(shù)使科學(xué)家能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)進(jìn)行基因修飾，從而也攜帶熒光蛋白報(bào)告基因。在生物樣品中，這允許科學(xué)家直接使感興趣的蛋白質(zhì)發(fā)熒光。然后可以直接跟蹤蛋白質(zhì)的位置，包括在活細(xì)胞中。